百令胶囊对实验性慢性肾衰的作用研究

宋3

上海中医药大学附属曙光医院 (200021)
何立群 郑平东 王 琛 王 怡
天然虫草在治疗慢性肾炎及慢性肾功能衰竭(CRF)方面的疗效已见诸文献报道，但因药源匮乏，价格昂贵，很难在临床上推广应用。百令胶囊为杭州中美华东制药有限公司1993年推出的国家一类新药发酵虫草菌粉胶囊制剂。是采用微生物深层液体培养方法生产的，具有与天然虫草基本一致的药理作用，是补虚损、益精气的理想中成药。在临床上应用百令胶囊治疗CRF已取得显著的疗效。为了验证其疗效和探讨疗效的机理，我们采用Platt法诱发慢性肾衰大鼠模型；观察百令胶囊对血肌酐(Scr)、尿素氮 (BUN)、血钙(Ca)、血磷及甲状旁腺素(PTH)，中分子物质(mms)等的作用，结果提示百令胶囊可明显改善肾功能，纠正高磷低钙血症，抑制PTH和mms，说明百令胶囊是治疗尿毒症的有效方药之一，其改善患者的临床症状与其降低CRF毒素潴留有关。
1 材料与方法
采用SD系雄性大白鼠体重200克左右(上海中医药大学动物实验中心提供)，饲料为市售固体饲料，饮用水均为自来水，自由饮水及摄食。
动物模型制作，采用platt法切除SD系雄性大白鼠5/6肾组织以制作肾衰模型，造模一周后抽血，根据血肌酐和尿素氮值分为模型组，百令胶囊组，使二组治疗前的值无显著性差异(P>0.05)，以避免影响疗效的观察，每组大鼠8只。
治疗方法，正常组，模型组以等体积自来水灌胃每天一次，百令胶囊组给药按5克/公斤，约为人的公斤体重20倍，溶于4毫升自来水制成混悬液灌胃，每日一次，共灌胃二月。
标本采集及观察指标：造模后的大白鼠予治疗前一天，治疗后30天各采血一次测Scr、BUN，到第60天全部处死，眼球采血，冷却离心，取血清或血浆作Hb、RBC、Scr、BUN、Ca、P、PTH和mms的测定。测定数据用平均表示，组间差异的显著性检测用t?检验的方法。
2 实验结果
2.1 百令胶囊对大鼠血Scr、BUN的影响，如表1所示。
表1 百令胶囊治疗CRF的疗效结果(X±S)

分组	日期	Scr(μmol/L)	BUN(mmol/L)
模型组	0	134.3±35.4	14.03±2.63
百令胶囊		137.8±11.9a	13.83±3.36a
模型组	30	181.2±25.9	13.50±0.96
百令胶囊		144.2±10.77b	13.81±0.92a
模型组	60	197.6±8.53	15.82±2.81
百令胶囊		161.6±3.84c	11.82±1.01b

注 与同组模型组相比a P>0.05,b P<0.05,c P<0.01。正常组正常值：Scr 60.6±9.8，BUN 6.84±1.72。
从表1可知，治疗前模型组与正常组相比，血Scr、BUN明显升高P<0.01)，说明CRF模型制作成功，第30天时百令胶囊显著降低血Scr，但对BUN疗效不明显，第60天时百令胶囊与模型组相比显著降低Scr、BUN。统计学上有显著性差异。
2.2 百令胶囊对大鼠PTH、Ca、P、mms的影响，见表2。
表2 百令胶囊治疗大鼠PTH、Ca、P、mms的作用

分组	日期	PTH(ng/L)	Ca(mmol/L)	P(mmol/L)	MMS(μg/L)
模型组	60	0.246±0.014	2.40±0.093	3.43±0.435	201.5±9.61
百令胶囊		0.143±0.059a	2.81±0.057a	2.23±0.081b	149.2±6.54b

注:与模型组相比a P<0.05,b P<0.01。
正常组正常值：PTH 0.154±0.013(ng/L), Ca 2.78±0.086(mmol/L), P 2.288±0.27(mmol/L),mms 132.5±5.56(μg/L)
从表2可知，百令胶囊组与模型组相比，各项指标均有明显好转，统计学上有显著性意义。
2.3 百令胶囊对大鼠RBC、Hb的影响，见表3。
从表3可以看出，百令胶囊对RBC，Hb有明显改善作用(P<0.05)。
2.4 百令胶囊对CRF大鼠肾组织病理学的影响。
在光镜下，应用HE染色和PAS法观察，模型组残肾肉眼体积明显增大，肿胀，镜检肾小球20个，呈代偿性肥大10(50%)，病变16个(80%)，其中局灶阶段性硬化8个(40%)，硬化区超过1/2界限4个(20%)，新月体形成6个(30%)，肾小球基底膜明显增厚，肾小球囊腔明显扩张，囊壁增厚，曲管管径明显增大，管壁变性，有大量蛋白管型形成，间质增宽，纤维增生，有大量炎症细胞浸润。而百令胶囊组残肾病变较模型组明显减轻，镜检肾小球20个，呈代偿性肥大8个(40%)，病变10个(50%)，其中局灶节段性硬化5个(25%)，硬化区超过1/2界限2个(20%)，新月体形成2个(10%)，肾小球基底膜增厚明显减轻，肾小球囊腔扩张不明显，囊壁变薄，曲管管径稍增大，管壁变性不明显，无管型可见，间质稍增宽，纤维轻度增生，可见有少量炎症细胞浸润。
表3 百令胶囊升高大鼠Hb、RBC的实验结果

分组	日期	Hb(g/dl)	RBC(10 12 /L)
模型组	60	12.14±2.32	6.43±1.82
百令胶囊		15.74±0.83a	8.59±0.18a

注 与模型组相比a P<0.05。正常组正常值，Hb
17.21±0.75 (g/l),RBC: 9.356±0.45 (10 12 /L)。
3 讨论
一般认为慢性肾功能衰竭的发病机理多以脾肾衰败，全血不足为本，湿毒内蕴为标，治疗过程中应以突出补虚为主，而中医认为冬虫夏草有壮命火，益精髓、补脾肾二虚之功效，现代药理也证实冬虫夏草能明显降低5/6肾切除大鼠血清Scr、BUN水平，对肾间质小管的病变有明显的防治效果，并可改善机体免疫功能低下。
从中西医结合的角度分析，慢性肾功能衰竭一般被认为是机体免疫功能紊乱，血色素、血红细胞明显下降，这些均属于血气“虚衰”的表现，而机体代谢产物(尿毒症毒素)蓄积等均隶属中医“实”的范畴。本实验结果表明，表3中百令胶囊能显著提高大白鼠血Hb、RBC，可以推测，补益脾肾，调补气血，确实可促进CRF动物血色素，红细胞的提高。起到扶正的效果，对改善整体状况，提高免疫功能有着一定作用 ［１］ 。与此同时，百令胶囊能显著降低Scr、BUN含量，并随着服药时间的延长，显示出较好延缓肾功能退化程度，说明百令胶囊是通过扶“正”——改善机体机能，而达到“祛邪”——祛除尿毒症毒素潴留目的。从而改善肾功能。
现有研究认为，高浓度中分子物质可引起周围神经病变，尿毒症脑病，红细胞生成抑制，细胞免疫功能低下，临床上尿毒症的各种症状的改善，与中分子物质的清除率有密切关系，可以通过监测体内中分子浓度作为尿毒症诊断、病情发展和预后的重要指标，可更好地采取预防和治疗措施 ［２］。
甲状旁腺素(PTH)是尿毒症最重要的大分子毒性物质之一，据报告，PTH过高可引起骨性营养不良、皮肤瘙痒、贫血、蛋白消耗及肾小管损害等一系列症状。目前国内外以控制蛋白摄入及低磷饮食疗法研究报道甚多，认为可以降低氮质，改善肾功能，最近有人提出一种磷的作用模式图，此图表示在最初的肾脏损伤之后，肾小球滤过率下降，使血磷上升，Ca、P沉积于肾组织，进一步使得肾小球滤过率下降，形成了新的循环，为了阻止这一恶性循环，限制磷的摄入是十分关键的，目的是使血磷降低，我们应用百令胶囊治疗后，能明显降低血清PTH及血磷，并明显升高血钙，清除mms，对延缓肾功能恶化占有很重要地位，其作用机理可能是通过减轻mms，PTH毒性作用，它是否进一步减轻各组织中钙含量，调整细胞内外钙比例，恢复细胞膜通透性和细胞功能，尚有待于深入研究。
慢性肾衰进行性发展的原因是多方面的，如有效肾单位学说，肾小球高滤过率学说以及肾小管高代谢学说等。但是无论何种原因引起的终末期肾脏疾病的，其肾组织改变常具有某些共性，其基本形态学特点主要有两大类，1.肾小球毛细血管由于系膜区增宽而受压闭塞。系膜区增宽包括系膜细胞增生，细胞外基质堆积和单核细胞积聚。2.肾小管间质病变也同样包括间质纤维化，细胞外基质堆积和单核，淋巴细胞浸润三个环节。本动物实验显示模型组肾小球数量明显减少，有效肾单位减少。肾小囊壁层基底膜增厚。以致肾小球滤过率降低。用百令胶囊治疗的动物的肾小球数量较造型组明显增多，接近正常，肾小囊壁基底膜增厚减轻，由于有效肾单位数量增多，提高了肾小球滤过率，从而使血中各种代谢产物、毒性物质得以排出。肾近曲小管刷状缘能重吸收全部葡萄糖、氨基酸、蛋白质、维生素等。吸收极大部分K+,Ca和无机磷。模型组肾小管细胞对PAS反应降低。说明肾小管的刷状缘受到严重破坏，从而影响肾小管的重吸收功能，百令胶囊组的肾小管细胞对PAS反应明显增强。说明肾小管刷状缘功能良好，使各种营养成分不致丢失，起到“扶正”的作用。
总之，本实验结果表明，百令胶囊确实能降低尿毒症毒素，调整钙磷代谢紊乱，纠正贫血，进而对肾功能的稳定和改善起了一定作用。是治疗CRF的有效方法之一。
参考文献
1 沈壮雷.升清降浊法治疗慢 性肾功能衰竭22例临床观察与升降失衡证的研究,《中医杂志》25:(1):24,1984
2 徐平西,中分子研究现状,《生物化学通讯》(3):28,1988